论文题目：谈述蛋白结肠癌细胞中CacyBP/SIP核转位后其下游信号分子的筛选
摘要：目的：在结肠癌中，钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)的入核可从推动结肠癌的发生进展，在人结肠癌SW480细胞中，筛选出CacyBP/SIP核转位后与其相互意义的蛋白质。办法：构建pGC-FU-CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒载体并且包装慢病毒上清，之后用病毒上清感染人SW480细胞，Westernblotting办法用来检测感染病毒后SW480细胞中融合蛋白CBP-SBP-cacyBP-3XNuclear targeting sequences和内源性CacyBP/SIP的蛋白表达状况。串联亲和层析法和免疫沉淀法被用来纯化与靶蛋白CacyBP/SIP相互意义的下游蛋白复合物，之后行质谱分析蛋白复合物的具体组成成分并分析数据结果。结果：CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒包装成功，病毒滴度为2×108TU/mL。 Western blotting办法以蛋白水平上证实了融合蛋白CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences在人SW480细胞的细胞核中的正确表达。串联亲和层析办法并未筛选与CacyBP/SIP相互意义的下游信号分子，但是以免疫沉淀法筛选的蛋白复合物质谱数据分析：肌动蛋白可能是与CacyBP/SIP相互意义的一个有作用蛋白分子。结论：1.成功包装CBP-SBP-cacyBP-3X-Nuclear targeting sequences慢病毒;2.慢病毒CBP-SBP-cacyBP-3X-Nuclear targeting sequences成功感染SW480细胞，融合蛋白在细胞核内成功表达;3肌动蛋白可能与CacyBP/SIP发生相互意义，推动结肠癌的发生进展。
关键词：CacyBP/SIP TAP串联亲和层析 免疫沉淀
摘要2-3
ABSTRACT3-8
前言8-11
第一部分 目的基因 CBP-SBP-CACYBP-3X-NUCLEAR TARGETING SEQUENCES 慢病毒的'包装11-22
前言11
材料和办法11-18
结果18-20
讨论20-22
第二部分 慢病毒感染人 SW480 细胞及融合蛋白 CBP-SBP-CACYBP-3X 在人SW480 细胞中的表达状况22-33
前言22
材料和办法22-28
结果28-31
讨论31-33
第三部分 TAP 串联亲和层析法筛选与 CACYBP/SIP 相互结合的下游信号蛋白分子并行质谱鉴定33-42
前言33
材料和办法33-37
结果37-41
讨论41-42
第四部分 免疫沉淀(IP)筛选与 CACYBP/SIP 相互结合的下游信号蛋白分子并行质谱分析42-50
前言42
材料和办法42-44
结果44-46
讨论46-50
结论50-51
参考文献51-55
综述55-61
参考文献59-61
致谢61-62
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